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Análisis microbiológico rápido Evaluación de diferentes métodos y sus aplicaciones

PRUEBAS MICROBIOLÓGICAS



Foro técnico moderado por Amy Ritter

Pueden utilizarse métodos para análisis microbiológicos rápidos para detectar la presencia de microorganismos en el ambiente o en un producto farmacéutico terminado con un tiempo para obtener resultados más corto que el de los métodos microbiológicos tradicionales. En este foro técnico, los expertos describen diferentes métodos de análisis microbiológico rápido y sus aplicaciones.

El análisis en busca de la presencia de microbios en un ambiente aséptico suele ser un proceso que toma semanas. Ahora, pueden usarse métodos para un rápido análisis microbiológico para detectar la presencia de microorganismos en el ambiente o en un producto farmacéutico terminado en horas o días. En este foro técnico, los expertos describen diferentes métodos del análisis rápido microbiológico y sus aplicaciones. Los que contribuyeron al foro son: Anne Baumstummler, científico senior; Renaud Chollet, jefe de biotecnologías y reactivos; Hervé Meder, gerente de proyecto de IyD; Céline Rofel, técnico de cultivo celular y biología molecular; Adrien Venchiarutti, ingeniero; y Sébastien Ribault, PhD, director de desarrollo y bioproducción, todos de Millipore SAS; y Ruth Eden, PhD, presidente de BioLumix.

Método de tinción fluorescente de microcolonias para la rápida detección de contaminación microbiana en cultivos de células de mamíferos

Anne Baumstummler, Renaud Chollet, Hervé Meder, Céline Rofel, Adrien Venchiarutti y Sébastien Ribault, Millipore SAS.

Los métodos tradicionales de análisis para la contaminación microbiana de cultivos de células de mamífero requieren de varios días para detectar la contaminación. La presencia de microorganismos es valorada típicamente mediante filtración por membrana e incubación sobre medios sólidos o inoculación en medios líquidos. Estos métodos basados en cultivos se apoyan en microorganismos que crecen y producen colonias visibles o turbidez. El tiempo para el resultado se mide en días para el análisis estándar de la biocarga (1). El método de tinción fluorescente de microcolonias (MFSM) descrito en este estudio es un método robusto, simple y rápido que facilita la detección de contaminantes microbianos. Puede aplicarse a muestras de cultivo celular con un tiempo para tener resultados que es de dos a cinco veces más corto que el microbiológico tradicional. La característica no destructiva los hace compatible con la identificación de contaminantes corriente abajo.

La necesidad de la velocidad. Muchas tecnologías y sistemas de detección tales como los ensayos de inmunoabsorción ligada a enzimas, la impedimetría, la bioluminiscencia, la citometría de flujo, y la reacción de la cadena de polimerasa surgieron en el campo de la detección rápida durante las dos décadas pasadas (2-4). Los pigmentos fluorescentes han sido utilizados rutinariamente en métodos tales como la técnica directa en filtro epifluorescente (DEFT) para monitorear la contaminación microbiológica (5). Esta técnica involucra la captura de microorganismos en la superficie de filtros de membrana de policarbonato, tinción y visualización utilizando microscopía epifluorescente. La sensibilidad está directamente vinculada al volumen filtrado y el número de campos observados. Una limitación de esta técnica es la incapacidad para diferenciar los microorganismos fluorescentes de las partículas autofluorescentes. Se han desarrollado sistemas automatizados y semi-automatizados para incrementar esta discriminación y mejorar la exactitud (6-8).

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