Cromatografía en membrana de alta capacidad de un solo uso
Desatorando la purificación de mAb corriente abajo.
BIO FORO
Carl Lawton
Desatorando la purificación de mAb corriente abajo.
Con títulos de anticuerpos siempre en aumento, la cromatografía en columna se ha con-vertido en un cuello de botella en el proceso corriente abajo de anticuerpos monoclonales (mAbs) y una barrera mayor en el desarrollo de una instalación para la manufactura de mAb de un solo uso realmente desechable. Los desarrollos recientes en cromatografía en membrana de alta capacidad han demostrado el potencial para proveer soluciones cromatográficas desechables. Existen diversas razones para considerar la purificación de un solo uso. Las tendencias que surgen en la industria biofarmacéutica son para instalaciones multiproducto más pequeñas, y flexibles que conduzcan a costos de manufactura más bajos. Estas tendencias han surgido debido a los títulos incrementados en los biorreactores, un tamaño de mercado más pequeño para los nuevos biofarmacéuticos, y el elevado costo de una instalación dedicada. La purificación de un solo uso permite una organización que capitalice estas tendencias emergentes.
Proteína A como paso de captura
La proteína A ha sido tradicionalmente el paso de captura más ampliamente usado en la purificación de mAbs. Ésta rinde un material de alta pureza >99.5%) que sólo necesita los pasos de pulido para remover los agregados, la proteína de la célula huésped (HCP), el ADN, virus y proteína A lixiviada. Sus desventajas son que no son de un solo uso ($ 9,000 - $ 12,000 dls por litro), necesita un ensayo de liberación con el ensayo de inmunoabsorción ligada a enzimas (es decir, proteína A), y requiere una instalación a prueba de fuego. En un esfuerzo para superar las desventajas de la proteína A, varias compañías han introducido la cromatografía de intercambio catiónico (es decir, lechos cromatográficos) como paso sustituto de captura con buenos resultados.
Captura con intercambio catiónico
Los investigadores en la compañía biofarmacéutica Percivia han demostrado la captura eficiente (>90 mg de mAb/mL de resina), el rendimiento (> 95%) y la pureza (95% de reducción en HCP) con el uso de una resina de intercambio catiónico, GigaCap S 650-M (Tosoh Bioscience) (1). Abbott Laboratories ha utilizado una resina de intercambio catiónico para un paso de captura para su fármaco Humira (adalimumab), y la compañía biofarmacéutica Medarex también ha usado una resina de intercambio catiónico para la captura de un mAb (1-2). En un estudio de optimización, Genentech (ahora parte de Roche) utilizó captura con intercambio catiónico (SP-Sepharose FF, Pharmacia) seguido por cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC) y cromatografía fuerte de intercambio aniónico para reducir el HCP a los niveles tradicionales alcanzados con la proteína A (3).