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Remoción de agregados en la purificación de anticuerpos monoclonales
Varias resinas cromatográficas están disponibles para la purificación corriente abajo.
RESOLUCIÓN DE PROBLEMAS Equipo y Procesado
William Evans
Varias resinas cromatográficas están disponibles para la purificación corriente abajo.
Los anticuerpos monoclonales (mAbs) son una clase exitosa de productos terapéuticos usados cada vez más en los pasados 15-20 años, aunque la manufactura de productos farmacéuticos de mAb seguros y efectivos crea muchos desafíos para la purificación de moléculas corriente abajo. Uno de estos desafíos es la tendencia de las moléculas del mAb a agregarse durante el procesado. Los agregados en el producto farmacéutico final son indeseables por dos razones principales. Primero, los agregados pueden causar una reducción en la eficacia del producto debido a la reducción de la concentración efectiva del producto farmacéutico. Segundo, los agregados incrementan el riesgo de una respuesta inmunogénica en pacientes, incluyendo la anafilaxis. Por estas razones, la remoción de los agregados es un punto central del proceso corriente abajo. El procedimiento de purificación del mAb debe reducir efectivamente la concentración de agregados en el producto farmacéutico y los procesos habitualmente son optimizados para obtener una concentración del agregado de menos del 1% para el producto farmacéutico final del mAb. Adicionalmente, los procesos deben ser optimizados para evitar la agregación adicional de la molécula del fármaco durante el procesado.
Remoción de agregados
La remoción de agregados, especialmente agregados solubles, presenta un reto debido a la similitud física y química de los agregados con el propio producto farmacéutico, el cual generalmente es un monómero. Los pasos de cromatografía pueden remover efectivamente los agregados y, típicamente, uno o más pasos cromatográficos en un proceso serán optimizados para la remoción de agregados. Sin embargo, la necesidad para la remoción de agregados debe estar equilibrada por la productividad del proceso, el rendimiento del paso, y la pureza global del producto a través de la remoción de proteínas de las células huésped y otros contaminantes.
Para productos de mAB, casi todos los procesos empiezan con un paso inicial de cromatografía de afinidad a la proteína A para retirar el volumen de impurezas presentes en la cosecha clarificada. Este paso inicial provee un producto que típicamente es >90% puro, y los posteriores pasos del proceso se enfocan en la remoción de las restantes impurezas menores. Sin embargo, debido a la similitud química de los agregados con la molécula del monómero, la cromatografía de Proteína A no remueve efectivamente los agregados ya presentes en la materia prima. Adicionalmente, las condiciones de elución de la Proteína A deben ser optimizadas para evitar más agregación de moléculas debido a la desnaturalización en los pHs ácidos típicamente utilizados. Finalmente, el eluato de Proteína A se mantiene generalmente a un pH bajo durante 30-60 minutos como una medida de inactivación viral. Esta espera tiene el potencial de exacerbar la formación de agregados.
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